內(nèi)參在PCR實(shí)驗(yàn)中的作用

內(nèi)參在PCR實(shí)驗(yàn)中的作用是用于校正上樣量、上樣過(guò)程中存在的實(shí)驗(yàn)誤差，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

內(nèi)參基因的選擇對(duì)于PCR實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要，它們通常被選為那些在處理因素作用的條件下不會(huì)發(fā)生表達(dá)改變的基因。通過(guò)檢測(cè)每個(gè)樣品內(nèi)參的量，可以校正上樣誤差，從而使定量的結(jié)果更為可信。內(nèi)參基因的優(yōu)點(diǎn)在于它們與樣品中的靶基因經(jīng)歷完全相同的處理程序，因此可以監(jiān)控從采樣、運(yùn)輸、核酸提取到擴(kuò)增的全部過(guò)程。然而，內(nèi)參基因的缺點(diǎn)是在不同物種、不同生理狀態(tài)下，以及不同組織中存在一定的差異。例如，如果樣品類型是口腔液、咽拭子等，內(nèi)參基因的量可能很低，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不成立；如果檢測(cè)的是環(huán)境樣品，則內(nèi)參基因可能完全失效。

此外，內(nèi)標(biāo)的使用也是PCR實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)重要概念，它分為內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)和外源性內(nèi)標(biāo)。內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo)，而外源性內(nèi)標(biāo)則是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的**特點(diǎn)是與靶序列共同擴(kuò)增，如果內(nèi)對(duì)照無(wú)擴(kuò)增曲線，則提示實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)存在問(wèn)題，該標(biāo)本實(shí)驗(yàn)無(wú)效。人工內(nèi)標(biāo)的添加包括使用不會(huì)干擾靶序列擴(kuò)增的人工合成的內(nèi)標(biāo)，以及使用人工合成的假病毒在核酸提取前在每一份樣品中加入等量的內(nèi)標(biāo)，以監(jiān)控樣品的提取到擴(kuò)增的過(guò)程。盡管如此，人工添加的內(nèi)標(biāo)不能監(jiān)控胞內(nèi)細(xì)菌病毒的釋放情況。