細胞房支原體污染為何頻頻發(fā)生？

細胞房支原體污染頻頻發(fā)生的原因多種多樣，以下是對這些原因的詳細分析：

一、人為因素

不良操作習(xí)慣：實驗室人員在操作過程中未嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，如未穿實驗服、未戴口罩、未熏蒸操作臺等，這些行為都可能將支原體帶入細胞培養(yǎng)物中。支原體可以通過臟衣服、實驗室服裝、人在層流氣流附近的講話、人的頭皮、打噴嚏、咳嗽等途徑傳播。

交叉污染：實驗室人員在處理多個細胞系時，如果重復(fù)使用移液器、手套等實驗工具，而未進行充分的清潔和消毒，就可能導(dǎo)致支原體在不同細胞系之間的交叉污染。

二、設(shè)備因素

實驗器材污染：使用不潔凈的實驗器材，如培養(yǎng)瓶、移液管等，這些器材可能殘留有支原體，從而在細胞培養(yǎng)過程中引入污染。

設(shè)備維護不當(dāng)：細胞培養(yǎng)所需的設(shè)備，如水浴鍋、振蕩培養(yǎng)箱、生物反應(yīng)器等，如果維護不當(dāng)或清潔不徹底，也可能成為支原體污染的來源。

三、環(huán)境因素

實驗室環(huán)境不潔凈：細胞培養(yǎng)需要在潔凈的環(huán)境中進行，如果實驗室環(huán)境不潔凈，存在大量的微生物污染，包括支原體，那么細胞培養(yǎng)物就很容易受到污染。

氣溶膠污染：在層流氣流中工作時，說話或移液時產(chǎn)生的氣溶膠也是造成污染的主要原因之一。這些氣溶膠中含有大量的微生物，包括支原體，它們可以在細胞傳代過程中進入培養(yǎng)基或從空氣中進入細胞培養(yǎng)物。

四、細胞培養(yǎng)基和血清因素

培養(yǎng)基污染：培養(yǎng)基在制備或保存過程中可能受到支原體的污染。尤其是粉末培養(yǎng)基，由于技術(shù)條件限制，支原體可能通過粉末培養(yǎng)基進行傳播。

血清污染：血清是細胞培養(yǎng)中常用的添加物，但如果血清本身受到支原體的污染，那么細胞培養(yǎng)物也會受到污染。血清一般是在高壓滅菌后才添加到培養(yǎng)基中的，但即使經(jīng)過高壓滅菌，也無法保證血清完全無污染。

五、支原體本身的特性

支原體大?。褐гw的直徑一般在0.1微米左右，而我們平時使用的除菌過濾一般孔徑為0.22微米，這種孔徑的過濾器只能起到過濾細菌的作用，多數(shù)支原體是無法被過濾掉的。

支原體種類多：已發(fā)現(xiàn)的支原體品種有100多種，但根據(jù)國內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，大約有二十多種支原體能污染細胞，這使得支原體污染的防控更加復(fù)雜。

六、預(yù)防措施

為了預(yù)防細胞房支原體污染的發(fā)生，可以采取以下措施：

嚴(yán)格控制環(huán)境污染：保持實驗室環(huán)境的潔凈度，定期清潔和消毒實驗室設(shè)備和器材。

嚴(yán)格實驗操作：實驗室人員應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，穿戴整潔的實驗服和口罩，避免在層流氣流附近講話、打噴嚏或咳嗽等行為。

使用一次性實驗器材：在處理多個細胞系時，應(yīng)使用一次性移液器、手套等實驗器材，避免交叉污染。

定期檢測支原體：定期對細胞培養(yǎng)物進行支原體檢測，及時發(fā)現(xiàn)并處理污染問題。

加入細胞支原體祛除劑：在不影響實驗結(jié)果的前提下，可在細胞培養(yǎng)基中加入適量的ZellShield?，以抑制支原體的生長。ZellShield?可作為常規(guī)添加劑直接用于培養(yǎng)基中，保護體外培養(yǎng)的細胞免受各種常見污染物的侵害。ZellShield?用于保護細胞培養(yǎng)物免受各種常見污染物的侵害，如細菌、真菌、酵母和支原體，這種保護作用是基于新型抗生素與大環(huán)內(nèi)酯的組合，抑制細菌DNA和蛋白質(zhì)的合成，沒有明顯的副作用。不需要使用常規(guī)抗生素，如青霉素、鏈霉素、制霉菌素等。

綜上所述，細胞房支原體污染頻頻發(fā)生的原因涉及人為因素、設(shè)備因素、環(huán)境因素、細胞培養(yǎng)基和血清因素以及支原體本身的特性等多個方面。為了預(yù)防支原體污染的發(fā)生，需要采取綜合性的防控措施。